黃熱病毒（YFV）實時熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書

【產品名稱】

商品名稱：黃熱病毒（YFV）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name ：Diagnostic Kit for Yellow Fever Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48份/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測的疑似感染病人的靜脈血等標本中黃熱病毒RNA，適用于黃熱病毒感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對黃熱病毒特異性引物，結合一條特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR技術對黃熱病毒RNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

YFV 陽性質控品 50μl ×1 管

陰性質控品 250μl ×1 管

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【標本采集】

疑似感染病人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標

本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

【使用方法】

檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿

選擇 ROX 參比熒光。

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲

線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內調節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節(jié))，以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

1.2RNA提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取

法），請按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性

對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

試劑 YFV 反應液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl，分別加入相應的反

應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數增長曲線；

可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct

值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

8. 產品性能指標

陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率

為 100％。

低檢測限：5.0×102copies/ml。

精密度：批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數（CV）均小于等于 3%。

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