ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在ELISA檢測試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。
ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA檢測試劑盒中似不恰當。
ELISA檢測試劑盒常壓滅菌操作要點:
(1)進鍋不擠壓：擺放待滅菌的菌種袋必須分層，每層菌種袋不可擺太擠，要留一定空隙，不能相互擠壓。不適宜將菌種袋臥疊，要分層立放，以保證蒸汽暢流和接種穴完好。為了避免棉塞易潮濕，可在棉塞上蓋一層薄膜或油紙，但覆蓋物不可太大，否則會影響上下層蒸汽暢流；也可將4個菌種袋的棉塞并攏，棉塞向下一同塞到4個菌種袋的空隙中，這樣塑料袋規(guī)格要加長，但防潮效果良好。
(2)及時滅菌：隨裝隨滅。配料到滅菌間隔時間越短越好，以免雜菌自繁。大規(guī)模生產時，要分鍋滅菌。
(3)攻頭：指開始滅菌時要大火猛燒。從開始滅菌到溫度達100℃，歷時越短越好，不能超過2小時，以免長時間高溫高濕造成雜菌自繁。當然，ELISA檢測試劑盒要做到這一點還取決于滅菌鍋的保溫保氣性能。
(4)控中間：指鍋體下部溫度達到100~C后，控制火勢燒穩(wěn)火，維持8～10小時。此間，溫度不可回落，滅菌操作者要堅守崗位，不能因通宵滅菌、疲勞或其他原因而懈怠，引起溫度回落。另外，常壓滅菌為了避免燒干應注意及時向蒸發(fā)鍋內補充水，但補水不能造成鍋內水停止沸騰，可考慮補充沸水或微量連續(xù)補水。可見，要想節(jié)省燃料，又要做到上述這些，建造一個保溫、保汽性能良好的滅菌鍋十分重要。
(5)保尾：指滅菌結束前要再一次大火猛燒。目的在于加大蒸汽量，滅菌結束后打開柜門時有大量蒸汽冒出，帶走棉塞濕氣。但此時要將連體滅菌鍋中蒸發(fā)鍋內的水排干。在開門時先將門拉開一條縫隙散氣，烘干棉塞，避免冷熱接觸產生冷凝水使棉塞受潮。
